新基因FAM92A1-289与增殖细胞核抗原PCNA相互作用的验证

摘要：

目的 利用免疫共沉淀技术验证未知蛋白FAM92A1-289和PCNA(增殖细胞核抗原)之间的相互作用.方法 构建带有嘌呤霉素抗性的载体CMV-SP6--GFP-FAM92A1-289和真核表达载体PCDNA3.1-PCNA,先将CMV-SP6-GFP-FAM92A1-289载体转染入Hela细胞,通过最合适浓度的嘌呤霉素筛选,得到稳定表达FAM92A1-289的Hela/FAM92A1-289细胞,再将载体PCDNA3.1-PCNA转染入Hela/ FAM92A1-289细胞,利用免疫共沉淀来验证FAM92A1-289和PCNA之间的相互作用.结果 构建的重组表达载体经双酶切、测序鉴定正确,稳定表达株Hela/ FAM92A1-289细胞构建成功,PCNA单克隆抗体沉淀蛋白复合物后,用GFP抗体进行Western blot法检测,检测出了GFP-FAM92A1-289蛋白.结论 免疫共沉淀证明了FAM92A1-289和PCNA之间存在相互作用.

关键词：FAM92A1-289、PCNA、免疫共沉淀、相互作用

所属期刊栏目：45

分类号：R737.33;Q2-33(肿瘤学)

资助基金：湖北省自然科学基金资助项目2012FFB02001

在线出版日期：2016-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：49-52