重组SRH融合蛋白工程菌发酵的工艺研究

摘要：

目的 通过对影响表达SRH融合蛋白工程菌发酵的主要因素的研究,建立适宜SRH融合蛋白工程菌的发酵工艺.方法 通过对发酵过程中的pH、溶氧调控、诱导温度、诱导时机及诱导时间进行优化建立SRH蛋白的发酵工艺,利用SDS-PAGE电泳分析表达情况.进一步利用离子交换和凝胶过滤层析对目的蛋白进行纯化,并对纯化后目的蛋白的溶栓活性和抗凝活性进行检测.结果 优化后发酵条件为:发酵pH为7.0、溶氧为45％、菌体浓度达到OD600=8时开始诱导,诱导温度为41℃,诱导时间为4.5h.该发酵条件下得菌量为25g/L.SRH蛋白表达量为45％,并且90％以上为可溶性表达,纯化后蛋白纯度达95％以上,纯品SRH蛋白溶栓活性为1.80×104AU/mg,抗凝活性为100AU/mg.结论 建立了SRH融合蛋白工程菌稳定的发酵工艺,该条件下SRH工程菌发酵蛋白表达量较高,多为可溶性表达,且杂蛋白较少,发酵产物具有生物学活性.

关键词：SRH融合蛋白、工程菌发酵、条件优化

所属期刊栏目：41

分类号：TQ9;TQ4

资助基金：国家科技重大专项"重大新药创制"基金资助项目2012ZX09102301-017;国家自然科学基金青年基金资助项目30901827

在线出版日期：2013-01-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：18-21