接触抑制对转化生长因子β诱导基因22(TSC-22)在心脏成纤维细胞中表达的影响

摘要：

目的 通过建立体外原代培养的新生大鼠心脏成纤维细胞模型,研究接触抑制对TSC -22表达的影响,并为进一步探明TSC -22在心脏成纤维细胞中的确切功能奠定基础.方法 采用差速贴壁法原代分离培养Sprague - Dawley大鼠心脏成纤维细胞,分别进行下述实验:①以不同初始密度接种细胞,分为两组:A组为50％融合组:以1.0×105/ml密度接种细胞于T25细胞培养瓶中,培养24h；B组为100％融合组:以2.0×105/ml密度接种细胞于T25细胞培养瓶中,培养24h；②均以2.0×105/ml的初始密度接种细胞于T25细胞培养瓶中,分为4组:A组为未融合组:接种后培养6h(至贴壁未融合状态)；B组为融合组:接种后培养24h(至100％融合状态)；C组为胰酶消化打破融合组:接种后培养至100％融合后,0.25％胰酶消化,离心混悬后重新贴壁,继续培养6h(此时细胞重新贴壁但未融合)；D组为胰酶消化重新达融合组:接种后培养至100％融合后,0.25％胰酶消化,离心混悬后重新贴壁,继续培养24h(此时细胞重新达到100％融合).以上各组分别提取mRNA和蛋白,应用实时定量PCR( real- time PCR)、蛋白印记(Western blotting)法分别检测TSC -22 mRNA、蛋白表达的变化.结果 实时定量RT -PCR和蛋白印记结果表明:①心脏成纤维细胞融合度达到100％,即发生接触抑制时,与50％融合度组相比,TSC -22的mRNA和蛋白水平水平均显著升高(P＜0.05)；②融合组心脏成纤维细胞与未融合组相比,TSC -22的mRNA和蛋白水平均显著升高；胰酶消化打破融合组心脏成纤维细胞与融合组相比,TSC -22的mRNA和蛋白水平均显著下降；胰酶消化重新达融合组成纤维细胞与胰酶消化打破融合组相比,TSC -22的mRNA和蛋白水平均显著升高(P均＜0.05).结论 本实验结果明确表明,在体外培养的心脏成纤维细胞中,接触抑制是诱导TSC -22表达升高的重要因素.当心脏成纤维细胞发生接触抑制时,TSC -22可能通过行使其转录因子的生物学功能,在接触抑制后所触发的信号通路中发挥重要调控作用.对TSC -22确切功能的深入研究,将有助于进一步理解和阐明心脏重构机制.

关键词：接触抑制、TSC-22、心脏成纤维细胞

所属期刊栏目：41

分类号：R77;R73

资助基金：国家自然科学基金资助项目81170206;高等学校博士学科点专项科研基金资助项目20091106110018

在线出版日期：2012-11-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：17-21