不同温度、时间、IPTG和菌种浓度对丁肝抗原蛋白表达量的影响

摘要：

目的 确定以大肠杆菌表达丁肝抗原的最佳条件,为规模生产以求研发丁肝ELISA诊断试剂奠定基础.方法 在不同温度、时间、IPTG和菌种浓度条件下,分别进行蛋白表达,取等体积样本进行SDS - PAGE电泳,经Image Lab软件分析,比较目的蛋白表达量,确定最佳表达条件.结果 在25℃、29℃、33℃和37℃条件下,蛋白表达量无统计意义的差别；在添加IPTG后的1、2、3、4、5和6h,表达量无统计意义的差别；在以0.25、0.5、1、2和4mmol/L IPTG诱导时,表达量无统计意义的差别.当添加诱导剂前,菌种的OD600值分别为1.236、0.772、0.542和0.384,目的蛋白表达量有显著意义的差别.以OD600值为1.236和0.772时,表达量最高,两者之间无统计意义的差别；OD600值为0.542时,表达量次之；OD600值为0.384时,表达量最低.结论 温度、表达时间和IPTG浓度在一定范围内对丁肝抗原蛋白表达量无影响；菌种的浓度是影响蛋白表达量的决定性因素；当菌种浓度在OD600值约为0.7～1.2时,以0.25mmolL IPTG在37℃,诱导表达1h为最佳表达条件.该条件下,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的41.5％.

关键词：丁肝、基因工程、抗原、表达

所属期刊栏目：41

分类号：R51;R44

资助基金：国家科技重大专项基金资助项目2008ZX10201

在线出版日期：2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：31-34