癌胚抗原T、B细胞表位短肽诱导特异性体液免疫反应研究

摘要：

目的 筛选癌胚抗原含T、B细胞表位的短肽并分析其诱导机体产生体液免疫的特性.方法 利用免疫信息学方法预测CEA CTL表位,结合我们早期对CEA B表位预测的结果,选择含多个CTL表位肽和B表位肽的CEA氨基酸序列580～598处短肽作为目的基因.目的基因密码子优化后采用pET32a(+)原核表达系统表达融合蛋白,经SDS - PAGE和Western blot-ting鉴定融合蛋白的抗原性；经镍整合亲和层析柱(Ni - NTA Agarose)纯化CEA580～598全长融合蛋白,纯化蛋白用佐剂乳化后经日本大耳白家兔背部皮下多点免疫注射,采用Western blotting检测血清抗体的特异性,采用ELISA法检测血清抗体水平及变化趋势.结果 含多个T、B细胞表位的短CEA580～598在大肠杆菌中获得了高效表达,表达量占总蛋白的25.6％；表达产物的相对分子质量(Mr)约21kDa,与预期Mr相符；Western blotting分析结果显示,在21kDa处出现特异性条带.日本大耳白兔经CEA580～598融合蛋白免疫后产生高水平的特异性抗体,与空载体和PBS对照组比较具有显著性差异(P＜0.05),制备的免疫血清不但能特异识别CEA580～598短肽,而且能特异识别天然CEA抗原.结论 CEA580～598短肽融合蛋白具有较强的免疫原性,诱导的兔免疫血清能特异性结合CEA抗原,为基于CEA表位疫苗的研究奠定理论和实验基础.

关键词：癌胚抗原、预测、ELISA、融合蛋白、CTL

所属期刊栏目：41

分类号：R39;S85

资助基金：浙江省自然科学基金资助项目Y2100660

在线出版日期：2012-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：65-68