染色质体外组装相关蛋白的表达纯化及组装体系的建立

摘要：

目的 提取并纯化真核细胞核内组蛋白,表达并纯化重组组蛋白、染色质组装相关因子NAP-1(nuc1ear assembly protein -1)及ACF( ATP - utilizing chromatin assembly and remodeling factor),并建立无细胞体外染色质组装体系.方法 在大肠杆菌BL21中表达并应用离子交换层析纯化组蛋白,从真核细胞HeLa细胞核中提取并应用羟基磷灰石纯化组蛋白八聚体,利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞Sf9中表达并纯化组装相关因子,应用纯化得到的蛋白在适宜条件下进行染色质体外组装,并用微球菌核酸酶酶切检测.结果 获得了高纯度的原核表达的组蛋白,真核细胞组蛋白八聚体及组蛋白特异伴侣NAP -1和ACF；建立了由质粒DNA、纯化的真核细胞核内重组组蛋白、重组NAP-1、重组ACF及ATP为核心成分的体外染色质组装的无细胞系统,经微球菌核酸酶检测组装成功.结论 利用体外分离纯化的多种重组蛋白,可成功构建基因的染色质模板,为在体外染色质模板上进行基因转录的调控机制研究奠定了基础.

关键词：组蛋白、ACF、NAP-1、染色质组装

所属期刊栏目：41

分类号：R37;S85

资助基金：国家自然科学基金资助项目30871382;教育部博士点基金资助项目20101106110023

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：19-23