香草素能瞬变受体亚型-1表达细胞系的构建与鉴定

摘要：

目的 构建香草素能瞬变受体亚型-1(TRPV1)膜蛋白稳定表达的细胞系.用于咳嗽与TRPV1关系的研究,以及新型镇咳药物的开发.方法 应用CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞,热激转化,将pCDNA3-TRPV1质粒转入到大肠杆菌感受态细胞中扩增,通过聚乙二醇沉淀法纯化质粒,纯化的pCDNA3- TRPV1质粒用磷酸钙转染法转入HEK293细胞.荧光显微镜观察黄绿色荧光蛋白表达;用5μmol/L的CAP处理转染细胞7h,台盼蓝双染色计算细胞病死率,作为细胞表达的证据.结果 经转化并培养后质粒大量扩增,酶切后获得目的 基因片段大小约2650bp,大小符合目的 基因.转染TRPV1的HEK293细胞在荧光显微镜下可清晰观察到黄绿色荧光.使用5μmol/L的辣椒素处理转染后细胞系7h,发现细胞病死率显著上升.结论 TRPV1在HEK293细胞中稳定表达,可用于构建"咳嗽细胞模型".

关键词：香草素能瞬变受体亚型-1(TRPV1)、HEK293细胞、转染、绿色荧光蛋白

所属期刊栏目：40

分类号：R97;R33

资助基金：国家科技支撑计划资助项目2006BAI19B05

在线出版日期：2011-04-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：40-43