改良人骨髓间充质干细胞分离方法提高细胞定向分化能力

摘要：

目的 改良人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)分离方法,提高细胞定向分化能力.方法 用密度梯度离心法从少量人骨髓中分离得到单个核细胞,贴壁培养3天后换液,实验组换液后72h内每隔12h更换新鲜培养液,传代时胰蛋白酶37℃作用2min后终止消化;对照组未经频繁换液,胰蛋白酶消化3min.镜下观察分离细胞的形态变化.用成骨、脂肪和软骨细胞诱导液诱导两组第3代(P3)细胞分化,碱性磷酸酶钙钴染色法、茜素红染色法和Von Kossa银染色法检测成骨细胞分化;油红O染色法检测脂肪细胞分化;阿尔新蓝染色法检测软骨细胞分化.结果 首次换液72h后,实验组与对照组相比,贴壁细胞数量较少但形态均一性高.不同染色结果显示:诱导分化成骨细胞14天时,实验组95%以上细胞分化,对照组为60%～70%;诱导分化脂肪细胞21天时,实验组50%～60%细胞分化,对照组为40%;诱导分化软骨细胞21天时,实验组90%以上细胞分化,对照组为60%～70%.结论 首次换液72h内频繁更换新鲜培养液和传代时缩短胰蛋白酶消化时间的方法能够提高hBM-MSCs的定向分化能力.

关键词：人骨髓间充质干细胞、成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞

所属期刊栏目：39

分类号：R32;R33

资助基金：浙江省省部共建项目WKJ2007-2-037;浙江省自然科学基金项目Y2090337

在线出版日期：2010-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：57-62