云南个旧肺鳞癌YTMLC细胞cDNA文库构建和鉴定

摘要：

目的构建云南个旧人肺鳞癌YTMLC-90细胞cDNA文库.方法从培养的人肺鳞癌YTMLC-90细胞株中提取总RNA,利用经修饰的oligo(dT)引物(含SfiⅠB酶切位点)合成cDNA第一链,同时根据真核生物mRNA5”端帽子结构特点,利用SMART寡核苷酸(含SfiⅠ A酶切位点)作为cDNA第一链在mRNA 5”端延伸出去的模板,进而以此序列为引物,利用LD-PCR(long-distance PCR)合成双链cDNA,双链cDNA经Sfi Ⅰ(Ⅰ A和Ⅰ B)酶切和过柱分级分离后,克隆入经Sfi Ⅰ酶切的载体后经体外包装而成cDNA文库.结果人肺癌细胞YTMLC-90的cDNA文库获得1.01×106 pfu/ml个重组子,重组率为93.2%,文库扩增后,滴度达5.24×109pfu/ml,插入cDNA的长度为7.50～3000bp.结论所构建的cDNA文库具有较好的质量,该文库为进一步筛选、克隆肺癌特异表达基因莫定了基础.

关键词：肺癌、cDNA、文库、构建、鉴定

所属期刊栏目：33

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：国家科技攻关项目2001BA703B11

在线出版日期：2006-11-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：14-16