小鼠抵抗素基因及其反义核酸真核表达体系的构建与鉴定

摘要：

目的 构建载有小鼠抵抗素(resistin)基因及其反义核酸的重组真核表达质粒,为下一步进行resistin生物功能研究打基础.方法 用resistin基因mRNA编码区序列特异引物,从小鼠脂肪组织中,通过RT-PCR的方法合成resistin cDNA,T4DNA连接酶将resistin cDNA克隆于pGEM-T栽体,经双酶切及测序鉴定克隆成功后再亚克隆于pcDNA3.1(+)或pcDNA3.1(-)真核表达栽体,并测序鉴定.结果 PCR产物长度与resistin cDNA理论长度363 bp相符:重组pGEM-T被EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ内切酶切为约3000 bp和355 bp两个片段,测序结果表明插入pGEM-T的DNA片段的核苷酸序列与小鼠resisdn基因mRNA编码区序列完全一致.重组pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(-)测序结果表明插入的DNA片段分别与小鼠resistin基因mRNA编码区序列和反义resistin基因mRNA编码区核苷酸序列一致.结论 成功克隆载有resistin基因和载有resistin基因反义核酸的重组真核表达质粒.

关键词：抵抗素、基因、真核表达质粒

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分类号：R58(内分泌腺疾病及代谢病)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30570886;教育部出国留学人员启动基金资助项目D002003008

在线出版日期：2009-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：53-55