贝伐单抗对视网膜色素上皮细胞抗氧化功能的影响
目的 观察贝伐单抗对人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞抗氧化功能的影响,以探讨抗新生血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)制剂治疗年龄相关性黄斑变性后黄斑部萎缩的可能机制.方法 用含终浓度0.25g·L-1贝伐单抗的DMED/F12培养液培养人RPE细胞系ARPE-19细胞,根据处理时间的不同分为Oh组(对照组)、12 h组、24 h组、48 h组、72 h组共5组,加入H2O2诱导氧化应激反应.用CCK-8法检测细胞活性,MitoSox Red荧光染色检测细胞内线粒体活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生水平,JC-1荧光染色检测细胞线粒体膜电位的变化;分别用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫蛋白印迹法(Western blot)检测各组促氧化因子NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4,NOX4)和抗氧化因子血红素氧合酶-1(heme oxygenase 1,HO-1) mRNA和蛋白的表达水平.结果 CCK-8检测结果显示:上述处理对细胞活性无显著影响,Oh组、12 h组、24h组、48h组和72 h组细胞活性分别为(100.2±3.3)％、(99.2±2.7)％、(102.5±6.4)％、(103.9±3.7)％和(103.6±3.3)％,差异无统计学意义(P＞0.05);与对照组相比,12 h、24h、48 h、72 h组细胞内ROS水平上升,差异有统计学意义(P＜0.05);线粒体膜电位在12 h、24h、48 h、72 h组均较对照组降低,差异有统计学意义(P＜0.01),48 h达最低,72 h时显著提高,但仍低于对照组.RT-PCR和Western blot检测结果显示:与对照组比较,NOX4 mRNA和蛋白的表达在12 h、24h、48 h和72 h组均上升,而且在24h表达最高,之后明显下降,但仍高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组比较,HO-1 mRNA的表达在24h、48 h和72 h组均下降,而HO-1蛋白的表达在48 h和72 h组下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 临床浓度的贝伐单抗可以降低RPE的抗氧化功能,可能是长期抗VEGF治疗后黄斑部进行性萎缩的原因之一.
年龄相关性黄斑变性、贝伐单抗、活性氧、人视网膜色素上皮细胞
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R774(眼科学)
2017-05-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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