miR-196b-5p促进成肌细胞增殖分化

摘要：

MicroRNA(miRNA)是一类由内源基因编码的长度约为 22 个核苷酸的非编码单链RNA分子,在动植物中参与转录后基因表达调控.大量研究表明,miRNA 调控骨骼肌的发育,主要表现在肌卫星细胞的激活及增殖、分化、肌管的形成等生物学过程.本实验室前期对大白猪背最长肌(longissimus dorsi,LD)和比目鱼肌(soleus muscle,Sol)进行 miRNA 测序,筛选鉴定到一个在不同骨骼肌中差异表达并且序列高度保守的 miR-196b-5p,目前miR-196b-5p在骨骼肌方面的研究尚未见报道.本研究进一步设计合成miR-196b-5p mimics和inhibitor对C2C12 细胞进行miR-196b-5p过表达及干扰表达,利用蛋白免疫印迹、实时荧光定量PCR检测、流式细胞术、免疫荧光染色等方法探究miR-196b-5p对成肌细胞增殖分化的影响,并利用生物信息学预测和双荧光素酶报告系统鉴定了miR-196b-5p的靶基因.结果显示,过表达miR-196b-5p显著增加细胞周期基因Cyclin B、Cyclin D和Cyclin E的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05);流式细胞周期检测结果显示,过表达miR-196b-5p显著增加S期细胞比例(P<0.05),表明 miR-196b-5p能够加快细胞周期进程;EdU染色结果显示,过表达 miR-196b-5p显著促进细胞增殖能力;相反,抑制miR-196b-5p的表达可以显著减弱成肌细胞增殖能力.进一步的功能研究发现,过表达miR-196b-5p能够显著增加成肌标志基因MyoD、MyoG和MyHC的表达水平(P<0.05);MyHC免疫荧光染色结果显示miR-196b-5p可以促进成肌细胞肌管形成,表明miR-196b-5p可以促进成肌细胞分化.生物信息学预测和双荧光素酶实验证明miR-196b-5p可以靶向Sirt1 基因,抑制该基因的表达.改变Sirt1 表达,不能够挽救 miR-196b-5p 影响细胞周期的表型,可以减弱 miR-196b-5p 对成肌细胞分化的促进作用,表明miR-196b-5p通过靶向Sirt1 促进成肌细胞分化.

关键词：miR-196b-5p、成肌细胞、增殖、分化、Sirt1

所属期刊栏目：45

分类号：R737.9;R394.2;S858.32

资助基金：国家重点基础研究发展计划（973计划）;国家自然科学基金

在线出版日期：2023-05-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：435-446