三种方法体外同步分离培养大鼠肝枯否细胞和星状细胞的比较

摘要：

目的 比较淋巴细胞分离液(LS)、Percoll液(PS)和Nycodenz液(NS)同步分离培养大鼠肝枯否细胞(KC)和星状细胞(HSC)的优缺点.方法 ①采用链酶蛋白酶E、胶原酶Ⅳ联合原位灌流消化,分别以LS、PS和NS的非连续密度梯度离心法同步分离培养大鼠KC和HSC.②碳素墨汁吞噬试验鉴定KC;α-SMA免疫细胞化学染色法鉴定HSC.③倒置相差显微镜下观测细胞形态,台盼蓝染色显示细胞活性,计数后计算细胞的得率、存活率和纯度.结果 体外成功地同步分离培养了KC和HSC;培养的KC吞噬功能明显,而传代HSC α-SMA免疫细胞化学染色阳性者几乎达100%;采用PS或NS体外同步分离KC的细胞得率和纯度均显著高于采用LS分离细胞所得(P<0.01),而采用NS体外同步分离肝KC的细胞存活率显著高于PS或LS分离细胞的存活率(P<0.05);分别采用LS、PS和NS同步分离HSC,三者的细胞存活率逐次升高(P<0.05或P<0.01),而使用LS同步分离的细胞虽然细胞得率比较高(P<0.05),但其细胞纯度较使用PS和NS明显降低(P<0.05),PS和NS分离获得的HSC得率和纯度均无明显统计学差异.结论 采用Percoll液和Nycodenz液体外同步分离培养大鼠肝KC和HSC效果好,且后者的细胞存活率最高.

关键词：细胞分离、枯否细胞、肝星状细胞、细胞培养、大鼠

所属期刊栏目：12

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家中医药管理局科研项目04-05JP51

在线出版日期：2008-05-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：220-224