哺乳动物正呼肠孤病毒血清3型Dearing σ1蛋白纯化及其多克隆抗体制备

摘要：

目的 纯化哺乳动物正呼肠孤病毒(MRV)血清3型Dearing(T3D)σ1融合蛋白,制备T3Dσ1多克隆抗体.方法 将T3DS1-pET28a重组质粒转化至Rosetta(DE3)感受态细胞,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖昔(IPTG)诱导目的蛋白大量表达,经组氨酸标签Ni-IDA层析柱纯化得到T3Dσ1融合蛋白.纯化得到的蛋白免疫新西兰白兔制备σ1蛋白特异性多克隆抗体.通过间接ELISA检测多克隆抗体效价,Western blot法及间接免疫荧光法(IFA)检测多克隆抗体特异性.结果 T3Dσ1蛋白相对分子质量(Mr)约为32 000,主要为包涵体形式,通过变性、复性处理纯化融合蛋白;免疫新西兰白兔成功制备出T3Dσ1效价大于1∶106的多克隆抗体,并成功应用于Western blot法及IFA检测.结论 成功制备了高效价及高灵敏度T3Dσ1多克隆抗体.

关键词：T3DS1-pET28a质粒、σ1蛋白、哺乳动物正呼肠孤病毒(MRV)、蛋白纯化、多克隆抗体

所属期刊栏目：38

分类号：Q939.47;S852.4+3;Q512;R392(微生物学)

资助基金：辽宁省教育厅基础研究项目JYTJCZR201909

在线出版日期：2022-06-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：171-176