用于小鼠及兔源IgG的通用型二抗PA/G-HRP融合蛋白的真核表达及活性检测

摘要：

目的 制备可与小鼠及兔来源IgG结合的通用型二抗,并用于多种免疫检测实验.方法 全基因合成金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)、链球菌蛋白G(SPG)与辣根过氧化物酶(HRP)融合基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNATM3.1骨架中,瞬时转染入人胚肾HEK293F细胞进行表达.通过SDS-PAGE、Western blot法鉴定融合蛋白表达情况,通过Western blot法、ELISA、免疫组织化学实验验证其应用.结果 酶切鉴定和基因测序显示pPA-HRP、pPG-HRP和pPA/G-HRP表达质粒构建成功.考马斯亮蓝染色和Western blot法结果表明,融合蛋白PA-HRP、PG-HRP和PA/G-HRP在HEK293F细胞中成功表达.Western blot法、ELISA和免疫组织化学结果显示,三种融合蛋白均能识别结合小鼠及兔来源的IgG,其中PA/G-HRP表现出更为灵敏的结合活性.结论 成功制备了具有高亲和力、通用型二抗功能的融合蛋白,PA/G-HRP能够替代传统抗小鼠IgG及抗兔IgG,可用于多种免疫检测实验.

关键词：金黄色葡萄球菌蛋白A (SPA)、链球菌蛋白G(SPG)、辣根过氧化物酶(HRP)、融合蛋白、真核表达

所属期刊栏目：37

分类号：R378.1+1;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金81630069,81972870

在线出版日期：2021-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：590-595