人视黄醇结合蛋白原核蛋白表达和兔多克隆抗体的制备

摘要：

目的 制备兔抗人视黄醇结合蛋白(RBP)多克隆抗体.方法 逆转录PCR扩增人RBP基因,将扩增产物连接到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组质粒pET-28a(+)-RBP,转化至大肠杆菌中.用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,表达产物经SDS-PAGE分析鉴定出阳性克隆,扩大培养.用组蛋白标签(His-tag)纯化柱纯化重组蛋白.将纯化的重组蛋白皮下注射到新西兰白兔,4次加强免疫得到抗血清.从抗血清中纯化出抗RBP多克隆抗体,并进行SDS-PAGE、ELISA和Western blot法鉴定.结果 成功构建了重组质粒pET-28a(+)-RBP,并获得高纯度的RBP重组蛋白,ELISA检测结果显示抗体效价达到1∶512 000.结论 成功制备兔抗人RBP多克隆抗体.

关键词：人视黄醇结合蛋白、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：35

分类号：R392.1;R392-33;R446.1

资助基金：国家自然科学基金81860002;海南省科协青年科技英才创新计划项目HAST201637;海南省科技厅高新技术项目ZDYF2016025

在线出版日期：2019-11-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：653-658