特异性结合幽门螺杆菌黏附蛋白A(HpaA)核酸适配子的筛选及鉴定
目的 通过指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选特异性结合幽门螺杆菌(Hpylori)黏附蛋白A(HpaA)的核酸适配子,并鉴定其结合特性.方法 构建pET28a/HpaA原核表达质粒并诱导表达纯化重组HpaA蛋白;以重组HpaA蛋白为靶标利用SELEX技术筛选出能够与HpaA具有高特异性、高亲和力结合的核酸适配子.随后利用筛选所得HpaA适配子通过体外实验验证与H.pylori菌体的结合以及对临床胃黏膜切片中H.pylori的检测效能.结果 本研究培养并提取ATCC26695菌株基因组,通过PCR扩增HpaA部分基因长度约699 bp,并成功克隆构建了原核表达质粒pET28a/HpaA.经异丙基β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达、纯化获得纯度约98％的重组HpaA蛋白作为筛选靶标.利用SELEX技术通过10轮正向筛选和5轮的负向筛选,获得6条与HpaA高亲和力的适配子分别命名为HA1～ HA6.其中适配子HA6具有较高的亲和力和特异性,且适配子HA6核心序列在体外仍表现出与H.pylori菌体较高的结合力;利用羟基荧光素(FAN)标记的HA6适配子对166例H.Pylori感染的患者胃黏膜中H.pylori进行检测,检出率为94.58％,高于同批次快速脲酶检测法的检出率(87.95％).结论 本研究筛选出的特异性结合H.pylori菌体表面HpaA的适配子,可能作为一种新的方法应用于胃黏膜组织中H.pylori的检测.
幽门螺杆菌(H.pylori)、幽门螺杆菌黏附蛋白A(HpaA)、指数富集的配体系统进化技术(SELEX)、适配子
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R378.2;R735.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家自然科学基金81601806
2019-10-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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