丝氨酸羟甲基转移酶2(SHMT2)调控AMPK/mTOR通路诱导自噬促进结肠癌细胞化疗耐药

摘要：

目的 探讨丝氨酸羟甲基转移酶2 (SHMT2)诱导自噬促进结肠癌细胞化疗耐药的机制.方法 通过TCGA数据库、实时定量PCR检测结肠癌组织SHMT2 mRNA水平,免疫组织化学染色法检测结肠癌组织SHMT2的表达和分布,Western blot法检测SW480、SW620、HCT116、CACO2、RKO、HCT8、HT15和HT29结肠癌细胞中的SHMT2蛋白水平;在CACO2结肠癌细胞过表达SHMT2后,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性、异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexin V-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测SHMT2对5-氟尿嘧啶(5-Fu)处理的结肠癌细胞的凋亡,透射电镜观察结肠癌细胞自噬小体,Western blot法检测自噬相关的信号通路微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ (LC3Ⅱ/Ⅰ)、P62、裂解型多腺苷二磷酸核糖聚合酶(c-PARP)和裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)的蛋白水平,信号通路蛋白质磷酸化广谱筛选抗体芯片及Western blot法检测腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK/mTOR)的磷酸化水平.结果 SHMT2在结肠癌组织及细胞中高表达;过表达SHMT2后,细胞活力显著增加,LC3Ⅱ/Ⅰ比值上升;过表达SHMT2后,AMPK磷酸化水平升高,mTOR磷酸化水平降低.结论 SHMT2可能通过促进AMPK磷酸化直接或间接抑制mTOR活性诱导自噬,抑制化疗诱导的细胞凋亡,降低化疗敏感性.

关键词：丝氨酸羟甲基转移酶2(SHMT2)、结肠癌化疗耐药、自噬、腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK/mTOR)

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分类号：R735.3+5;Q279;R392-33;Q255(肿瘤学)

资助基金：陕西省卫计委科技计划2016D065

在线出版日期：2019-07-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：344-350,356