小鼠抗人FOXO3保守区多克隆抗体的制备和鉴定

摘要：

目的 纯化叉头盒蛋白O3(FOXO3)基因保守区蛋白,并制备其多克隆抗体.方法 利用生物信息学分析预测FOXO3蛋白的保守区,通过PCR扩增编码FOXO3蛋白第290～ 472位氨基酸DNA片段并克隆至pET28a原核表达载体中,转化到大肠杆菌BL21,诱导表达并获得可溶性蛋白,经镍离子柱亲和纯化,免疫小鼠制备抗血清,随后采用ELISA、Western blot法和免疫沉淀实验检测抗体的效价、特异性以及应用范围.结果 成功构建表达载体pET28 a-FOXO3 (aa290-472),实现可溶性FOXO3蛋白的表达和抗体制备.SDS-PAGE和Western blot实验结果证实,FOXO3蛋白与预期结果一致,抗血清能够特异性地识别原核、真核FOXO3蛋白以及其天然抗原表位.结论 成功制备了小鼠抗人FOXO3的多克隆抗体,且抗体对内源性FOXO3具有较好的反应性和特异性.

关键词：叉头盒蛋白O3(FOXO3)、多克隆抗体、融合蛋白

所属期刊栏目：33

分类号：R34;R392.1;R392-33;Q344+.13(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金81501360

在线出版日期：2017-08-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：838-844