人线粒体转录终止因子2(MTERF2)在Caski宫颈癌细胞的表达和定位
目的 构建人线粒体转录终止因子2(MTERF2)基因真核表达载体,并在人Caski宫颈癌细胞中过表达,观察其编码蛋白质在Caski细胞中的定位.方法 从Caski细胞中提取总RNA,采用反转录PCR扩增人MTERF2基因可读框序列,将其重组于p3×FLAG-CMV-14载体中,利用PCR和DNA测序鉴定重组子正确性;并用脂质体法转染至Caski细胞,转染24、32、48 h,采用Western blot法检测MTERF2蛋白水平,通过免疫荧光细胞化学染色观察其亚细胞定位情况.结果 经过PCR和DNA测序鉴定,人MTERF2基因可读框正确地插入到真核表达质粒中,大小为1158 bp,表达的蛋白相对分子质量(Mr)为44 000,与预计大小相符.转染p3×FLAG-MTERF2质粒的Caski细胞培养24h,可检测到目的蛋白表达,该蛋白主要定位于线粒体中.结论 在Caski细胞成功表达了MTERF2蛋白并证实其定位于线粒体.
线粒体转录终止因子2 (MTERF2)、Caski宫颈癌细胞、真核表达、蛋白定位
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R392-33;R711.74;Q344+.13
国家自然科学基金81560458,31601155;云南省中青年学术与技术带头人后备人才项目;云南省教育厅科学研究基金2014Z126,2016ZDX105;大理大学博士科研启动基金BSKY2012018;大理大学大学生创新创业计划项目CXCY-X-2016-13
2017-08-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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