人蔗糖酶蛋白在大肠杆菌的诱导表达与纯化

摘要：

目的 构建人蔗糖酶(hSUC)基因原核表达载体,诱导表达获得融合蛋白.方法 采用反转录PCR法扩增得到hSUC基因片段,并将其克隆到表达载体pET-28a(+)中,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌中表达,采用Ni柱亲和层析纯化重组蛋白,对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 克隆得到1482 bp目的基因,酶切和测序证实hSUC基因片段成功插入到pET-28a(+)表达载体.表达的融合蛋白质相对分子质量(Mr)为61 240,Westernb1ot结果显示融合蛋白可以与hSUC抗体特异性结合.结论 成功在大肠杆菌中表达和纯化hSUC融合蛋白.

关键词：蔗糖酶、α-葡萄糖苷酶、大肠杆菌、基因表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：31

分类号：Q344+.13;Q786;R34(遗传学分支学科)

资助基金：贵州省科技厅社会发展攻关项目[黔科合SY字20123091];2010年遵义医学院青年科研启动基金资助F-501

在线出版日期：2016-01-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1629-1632