人羊膜上皮细胞的体外培养及标志分子的检测分析

摘要：

目的 进行人羊膜上皮细胞(HAEC)的体外培养,观察其生物学特性,检测其分子特征.方法 取剖宫产术后人羊膜,应用酶消化法获得HAEC,倒置显微镜下观察细胞生长变化;CCK-8法检测HAEC的生长曲线;Giemsa染色观察HAEC的克隆形成率;流式细胞术检测HAEC的细胞周期;取第2代HAEC,流式细胞术检测其CD29、CD31、CD44、CD59、CD105、CD117、CD133、HLA-DR的表达.免疫荧光法检测其CD9、上皮性钙黏素(E-cadherin)、足糖萼素样蛋白(PODXL)、阶段特异性胚胎表面抗原4(SSEA-4)、性别决定区Y相关因子2蛋白(SOX2)、SSEA-1、Nanog蛋白、八聚体结合蛋白3/4 (Oct-3/4)的表达情况.结果 酶消化法可以获得较纯的HAEC,细胞呈贴壁生长,呈多角形,核呈圆形.细胞在贴壁后第3天进入指数生长期.细胞周期分析显示66％处于G0/G1期,S期细胞占31.69％,G2/M期细胞占2.31％.HAEC的克隆形成率为(9.33±2.00)％.流式细胞仪检测显示HAEC阳性表达CD44、CD29、CD105、CD59,不表达CD31、CD117、CD133、HLA-DR.免疫荧光法检测显示HAEC表达胚胎干细胞相关分子CD9、E-cadherin、PODXL、SSEA-4、SOX2、SSEA-1、Nanog、Oct-3/4.结论 HAEC可以在体外培养生长并在一定时期内保持其增殖活性;HAEC表达胚胎干细胞相关的表面标志分子.

关键词：羊膜上皮细胞、细胞培养、胚胎干细胞

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分类号：R392-33;Q253;Q813.1+1

资助基金：国家自然科学基金30872808,81100637;暨南大学第一临床医学院科研培育专项基金20120710

在线出版日期：2014-12-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1318-1321