B19和B21单倍型鸡NK细胞受体B-NK19和B-NK21的多克隆抗体制备及鉴定

摘要：

目的 利用大肠杆菌系统表达对多种禽病存在敏感性差异的B19和B21单倍型鸡NK细胞抑制性受体B-NK基因,并制备其多克隆抗体.方法 分别提取B19和B21鸡外周血淋巴细胞总RNA,采用反转录PCR法扩增B-NK基因(分别命名为B-NK19和B-NK21),克隆至pET-30a原核表达载体中,经酶切和PCR鉴定构建重组质粒.转入到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE分析外源蛋白的表达.将含有与组氨酸(His)标签融合表达的外源蛋白胶条切下,多点皮下免疫新西兰兔,分别制备B-NK19和B-NK21特异性多克隆抗体.利用Western blot法鉴定其组织相容性复合体(MHC)单倍型特异性.结果 成功构建了原核表达重组质粒pET-B-NK19和pET-B-NK21,利用IPTG在37℃诱导4h后目的蛋白获得表达,免疫5次后收获兔多克隆抗体,Western blot表明B-NK19和B-NK21蛋白存在免疫学交叉反应和部分特异性.结论 对多种禽病具有敏感性差异的MHC单倍体型B19和B21鸡的NK细胞抑制性受体B-NK蛋白存在抗原反应交叉性,其多克隆抗体具有部分特异性.

关键词：鸡NK细胞受体、B-NK、B19单倍型、B21单倍型、多克隆抗体

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分类号：R392.11;R392-33;S831.9

资助基金：国家高技术研究发展技划8632011AA100305;国家自然科学基金31101800;国家科技支撑项目2013BAK11B02

在线出版日期：2014-12-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1274-1277