中性粒细胞胞外诱捕网生成和降解方法的建立和评价

摘要：

目的 中性粒细胞胞外诱捕网(NET)是近年来新发现的与自身免疫性疾病和血栓形成有关的结构,本研究拟建立一种评价NET体外生成和降解的方法.方法 通过Ficoll-Histopaque密度梯度离心法从健康人外周血分离中性粒细胞,利用佛波酯(PMA)诱导其产生NET,免疫荧光细胞化学染色和琼脂糖凝胶电泳验证NET的形成,PicoGreen dsDNA染色结合荧光强度进行定量分析,研究DNA酶(DNaseⅠ)和健康人血清对NET的降解.结果 Ficoll密度梯度离心法分离的中性粒细胞纯度达到95％.激光共聚焦显微成像显示NET网状结构主要由DNA和组蛋白组成,琼脂糖凝胶电泳显示NET的DNA条带大小超过10 000 bp.DNase和健康人血青均可降解体外诱导的NET,但程度不同.结论 本实验成功建立了人NET体外诱导生成和降解的方法.

关键词：中性粒细胞、中性粒细胞胞外诱捕网、佛波酯

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分类号：R392.11;S852.4+2

资助基金：国家自然科学基金81102088,81170238,81070121;天津市自然科学基金12JCYBJC16600,11JCYBJC12000,09ZCZDSF04200

在线出版日期：2014-09-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：986-988,992