靶向人Ⅰ型胶原蛋白α1链分子的shRNA真核表达载体的构建与鉴定

摘要：

目的 构建靶向人Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)分子的shRNA真核表达载体并检测其对靶分子的干扰效应.方法根据靶分子COL1A1基因序列,设计、合成编码其shRNA的互补寡核苷酸序列,克隆至线性化的pSilencerTM2.1-U6 neo载体中并对重组质粒进行酶切分析及测序鉴定；脂质体介导重组质粒转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,经G418筛选获稳定表达细胞株,RT-PCR及Western blot法检测其对靶分子COL1A1表达的影响.结果 酶切及DNA测序证实重组质粒pshRNA-COL1A1序列正确.与对照组比较,重组表达质粒pshRNA-COL1A1-1和pshRNA-COL1A1-2在mRNA和蛋白水平均能显著抑制COL1A1基因的表达(P＜0.05),抑制率分别为(44.41％±3.90％,63.05％±3.13％)及(45.50％±2.71％,66.98％±2.08％).结论 成功构建靶向人乳腺癌MDA-MB-231细胞COL1 A1基因的shRNA真核表达载体.

关键词：乳腺癌、Ⅰ型胶原蛋白α1链、短发夹RNA、真核表达载体

所属期刊栏目：29

分类号：Q786;R392-33(基因工程（遗传工程）)

资助基金：广东省医学科研基金B2012203;广东省领军人才专项基金C1030925

在线出版日期：2013-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1032-1035