肾癌相关抗原G250的原核表达、纯化及抗原活性检测

摘要：

目的 构建原核表达质粒pET-42a-hG250,表达并纯化肾癌相关抗原G250融合蛋白,并检测G250融合蛋白的抗原活性.方法 利用PCR从pGEM-T-G250质粒中扩增G250基因片段(112～1242 bp),测序正确后将其克隆至原核表达载体pET-42a中构建重组载体pET-42a-hG250.将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,通过IPTG诱导G250蛋白的原核表达,随后将表达的融合蛋白进行纯化.经SDS-PAGE分析后,Western blot法检测纯化的蛋白,将纯化蛋白进一步包板后用ELISA对其抗原活性进行评价.结果 酶切和测序结果证实pET-42a-hG250原核表达载体构建成功；转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的G250融合蛋白；Western b1ot法和ELISA检测证实纯化的蛋白能与特异性的抗体发生反应,显示纯化后的G250融合蛋白具有良好的免疫原性.结论 成功构建了肾癌相关抗原G250基因的原核表达载体,纯化获得了G250融合蛋白,该蛋白具有良好的抗原活性.

关键词：肾癌、原核表达、蛋白纯化、G250

所属期刊栏目：29

分类号：R392-33;R737.11

资助基金：国家自然科学基金30840094

在线出版日期：2013-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：269-272