β-淀粉样蛋白单链抗体表达和纯化条件的优化

摘要：

目的:优化β-淀粉样蛋白单链抗体(scFv)的诱导表达和纯化条件.方法:在固定诱导表达时间和诱导表达温度的条件下,采用不同终浓度的IPTG进行诱导表达,通过SDS-PAGE分析全菌液总蛋白中目的蛋白F3 scFv的表达水平,确定所需诱导剂IPTG的最佳浓度.在目的蛋白结合到亲和层析柱之后,采用不同终浓度的咪唑溶液进行洗脱,通过收集各管洗脱液、Western blot等方法确定预洗脱液咪唑的最佳浓度.结果:E3 scFv在20℃诱导表达18 h时,所需诱导剂IPTG的最佳浓度为0.1 mmol/L；纯化时,预洗脱液咪唑的最佳浓度为10 mmoL/L.结论:通过优化上述条件,我们建立了一个高效表达及纯化F3 scFv的方法,为后续的研究奠定了基础.

关键词：β-淀粉样蛋白、单链抗体、表达纯化、条件优化

所属期刊栏目：28

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金81172119

在线出版日期：2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：718-721