重组凝乳酶原基因的原核表达及其抗血清的制备

摘要：

目的:原核细胞表达密码子优化的凝乳酶原并制备抗血清.方法:以大肠杆菌密码子的偏爱性整合牛、羊和骆驼的凝乳酶原(pCHY)序列后分别克隆至大肠杆菌原核表达载体pET-30a和真核高效抗体制备核酸疫苗载体pcDNA3-AAT-COMP-C3d3( pcD-ACC)上.原核表达质粒pET30a-pCHY转入大肠杆菌后经IPTG的诱导得到高表达的凝乳酶原,作为检测抗原.真核表达质粒pcDNA3-AAT-COMP-pCHY-C3d3(pACCC)用水动力转染法验证其在mRNA水平的表达后,采用DNA prime-protein boost的策略免疫新西兰大白兔后制备抗体并检测其特异性和效价.结果:SDS-PAGE和Western blot检测表明,成功表达出与预期相对分子质量大小相符的重组凝乳酶原；ELISA检测表明获得高效价的凝乳酶原抗血清.结论:通过密码子优化及核酸疫苗载体pcD-ACC联合DNAprime-protein boost的免疫策略可制备高表达量的重组凝乳酶原,得到接近于蛋白免疫水平的高滴度抗体.

关键词：凝乳酶原、密码子优化、DNA prime-protein boost、抗体滴度

所属期刊栏目：28

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30860265;新疆生物资源基因工程重点实验室基金XJDX0201-2010-2

在线出版日期：2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：715-717,721