环氧合酶2mRNA3'UTR荧光素酶报告基因载体的构建

摘要：

目的:通过构建环氧合酶2( COX2)mRNA 3'UTR的全长及其截短体荧光素酶报告基因载体,为研究COX2基因在炎症条件下的的转录后调控提供有效的工具.方法:通过从胃癌细胞SGC-7901提取RNA,反转录成cDNA后,以此为模板,PCR扩增COX23’非翻译区(3’-UTR)全长及截短的序列,并将该序列连接到荧光素酶报告基因载体pGL3-control,构建pGL3-COX2 3'UTR全长及pGL3 -COX23' UTR不同截短体.测序后将上述载体分别与pRL-TK载体共转染293-T细胞,48 h后裂解细胞检测荧光素酶的活性.最后通过ELISA检测在IL-1β的刺激下COX2的下游产物PGE2的表达,并再次测定pGL3-COX2 3' UTR全长的荧光素酶活性.结果:成功构建了pGL3-COX2 3'UTR全长及pGL3 -COX23’UTR不同截短体,荧光素酶报告系统表明COX2 3 'UTR对基因表达具有较强的调控作用.而在炎症因子IL-1β的刺激下,pGL3-COX2 3'UTR全长荧光素酶的活性明显升高.结论:成功构建了COX2 mRNA 3’UTR荧光素酶报告基因载体并证明在IL-13的刺激下COX2表达上调,参与转录后调控.

关键词：环氧合酶2、3’非翻译区、双荧光素酶报告系统、转录后调控

所属期刊栏目：28

分类号：Q752(分子遗传学)

资助基金：国家自然科学基金30900537

在线出版日期：2012-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：656-659