重组嵌合抗人CD22四价基因工程抗体在毕赤酵母中的表达及活性检测

摘要：

目的:采用酵母多拷贝分泌表达载体pPIC9K表达重组嵌合抗人CD22四价基因工程抗体cRFB4FC和cRFB4CH3,并进行活性检测.方法:采用基因克隆技术获得两抗体的基因,然后将其克隆入表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K/cRFB4FC和pPIC9K/cRFB4CH3,经测序鉴定正确,电转化人毕赤酵母SMD1163中,将经G418抗性筛选出的重组酵母菌株进行PCR鉴定,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,经ELISA检测生物学活性.采用正交试验优化重组酵母菌株的表达条件以提高抗体的表达量.结果:获得重组表达质粒pPIC9K/cRFB4FC和pPIC9 K/cRFB4CH3,经G418筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母菌株,经甲醇诱导表达出cRFB4FC和cRFB4CH3蛋白.它们在SDS-PAGE上分别表现为相对分子质量(Mr)约326 000和295 000的蛋白区带,在Western blot分析中均可被山羊抗人IgGFc单克隆抗体(mAb)识别,经ELISA分析它们都具有较高的生物学活性.优化表达条件后,抗体的表达量分别提高了196.4％和151.7％.结论:抗体cRFB4FC和cRFB4CH3在酵母菌SMD1163中成功获得高效分泌表达,并有免疫学活性.

关键词：CD22、人CD22抗体、B细胞淋巴瘤、毕赤酵母

所属期刊栏目：28

分类号：R392.11

资助基金：广西壮族自治区自然科学基金资助项目桂科自0991220

在线出版日期：2012-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：629-632