人源性噬菌体抗体库的构建及抗amylin抗体的初步筛选

摘要：

目的:构建人源性噬菌体抗体库,从中筛选胰淀素(amylin)单克隆抗体(mAb),测定其特异性及抗原结合活性.方法:从正常健康人的外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PcR方法扩增人免疫球蛋白Fd段和轻链基因,构建噬菌体抗体库.酶切和PcR鉴定后,阳性克隆进行DNA测序分析.用人amylin抗原对抗体库进行筛选富集,将得到的阳性克隆进行Phage-ELISA鉴定,结果进行统计学分析.结果:最终构建的抗体库库容约为0.8×108,酶切鉴定显示有插入片段,抗体库重组率为70％.阳性克隆进行DNA测序证实所获基因为人免疫球蛋白可变区基因.以amylin抗原进行3轮筛选,抗体库得到特异性富集.阳性克隆进行Phage-ELISA检测证实有良好的抗胰淀素抗原的特异性.结论:成功构建了一个人源性噬菌体抗体库,为从中获得人源抗amylin的mAb奠定了实验基础.

关键词：噬菌体抗体库、胰淀素、人源性单克隆抗体

所属期刊栏目：28

分类号：R392.11

资助基金：天津市自然科学基金资助项目05YFMGC004000

在线出版日期：2012-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：618-622