蛋白激酶PKR的克隆表达及与其相互作用的蛋白质的亲和纯化

摘要：

目的:克隆并表达双链RNA调节的蛋白激酶(PKR)基因,以纯化分离与PKR相互作用的蛋白质.方法:设计特异性引物,PCR扩增分别得到FLAG-PKR-HA和HAPKR-FLAG基因片段,克隆至表达载体pSG5中.将重组质粒通过脂质体法转染PKR稳定沉默(PKRkd)的HeLa细胞,Western blot检测PKR及标签表达情况；最后,利用HA、FLAG串联亲和纯化系统(TAP)纯化分离与PKR相互作用的蛋白,Western blot技术及银染SDS-PAGE验证PKR蛋白复合物的纯化和分离情况.结果:成功构建了PKR融合蛋白表达载体及FLAG、HA亲和纯化系统,SDS-PAGE和银染结果显示TAP系统分离得到了PKR蛋白带和两条可能与PKR相互作用的蛋白质片段.结论:成功纯化和分离了与PKR相互作用的蛋白质,为进一步研究奠定了基础.

关键词：PKR、亲和、纯化、相互作用

所属期刊栏目：28

分类号：R392.11

资助基金：国家重点基础研究发展计划9732010CB530004;国家自然科学基金30901345;广东省自然科学基金9151008901000083

在线出版日期：2012-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：592-595