天花粉蛋白突变体TCSFYY163-165CSA的构建表达与纯化

摘要：

目的:构建天花粉蛋白(TCS)突变体基因,并在原核系统进行表达及纯化.方法:应用计算机预测TCS分子上可能的抗原决定簇(FYY163 - 165),并进行定点突变.以栝楼基因组DNA为模扳,经PCR扩增突变基因,与pRSET-A表达载体连接,转化感受态E.coli DH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序.将阳性重组质粒转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,对表达产物进行Western blot法鉴定和Ni-NTA层析纯化.结果:构建了带有TCS突变体基因(TCSFYY163- 165CSA)的重组表达质粒,使目的蛋白在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,表达产物经纯化后,得到均一的TCS突变体蛋白.结论:成功地构建了TCS突变体基因TCSFYY163 - 165CSA,并获得高效表达,为基因工程方法改造TCS提供了新的途径.

关键词：天花粉蛋白、人类免疫缺陷病毒、定点突变、原核表达、纯化

所属期刊栏目：28

分类号：R392.11

资助基金：陕西省社会发展攻关计划2011K15-01-02

在线出版日期：2012-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：583-585