miR-152在脊髓损伤后表达变化及其真核表达载体的构建
目的:观察脊髓损伤后miR-152的表达变化;构建miR-152真核表达载体并观察其在细胞中的表达.方法:利用原位杂交技术观察miR-152在脊髓损伤过程中的变化及细胞水平分布.根据miR-152的基因序列,设计引物,经PCR扩增后连接到pCIG质粒,构建含有EGFP报告基因的pCIG-miR-152真核表达载体;将pCIG-miR-152载体转染HeLa细胞,通过观察EGFP报告基因的表达以及qPCR方法鉴定miR-152可在真核细胞中过表达;通过生物信息学的方法预测miR-152的靶基因.结果:miR-152在正常脊髓中表达水平低,而在脊髓损伤后表达水平逐渐升高,尤其是在损伤后第14天和第21天.在损伤的脊髓中miR-152主要分布在损伤区周围的神经元中.成功构建了带有EGFP报告基因的miR-152真核表达质粒pCIG-miR-152,并能在真核细胞中高表达miR-152.结论:miR-152在损伤的脊髓神经元中高表达;成功构建了高表达的miR-152真核表达载体.
脊髓损伤、microRNA、真核表达载体
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R392
"211工程"建设经费攻关项目;国家科技重大专项2009ZX09301-009-PT02
2012-03-20(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
200-202