大鼠Toll样受体2基因siRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定

摘要：

目的:构建特异性抑制大鼠TLR2基因的重组腺病毒载体,并在大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞中进行功能鉴定.方法:体外合成3对大鼠siTLR2的双链DNA序列,经退火定向克隆到穿梭质粒pSES-HUS中获得pSES-HUS-siTR2质粒,PmeI线性化后在BJ5183细菌中与pAdEasy-1骨架质粒进行同源重组获得pAd-siTLR2质粒,脂质体转染HEK293细胞,包装获得Ad-siTLR2腺病毒颗粒,继而感染PC12细胞,通过Real-time PCR和Western blot方法检测3对siRNA对TLR2基因的抑制效率.结果:PCR凝胶电泳和测序结果均证实目的基因正确克隆到腺病毒载体中；Real-time PCR和Western blot结果显示:携带siTLR2的病毒颗粒能够在mRNA和蛋白水平有效抑制PC12细胞中TLR2的表达.结论:成功构建了AdsiTLR2重组腺病毒载体,并在HEK293细胞中包装成重组腺病毒,转染PC12细胞后能有效抑制TLR2基因的表达,为进一步研究TLR2在不同疾病中的免疫调节机制奠定重要基础.

关键词：Toll样受体2、siRNA、重组腺病毒载体、免疫调节

所属期刊栏目：28

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金30872670;81070286;重庆市卫生局重点项目渝卫2009-1-41

在线出版日期：2012-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：144-147