耐受性CD8+NKT细胞体外增殖能力的鉴定
目的:利用CFSE标记细胞,流式细胞术(FCM)检测法,解析超抗原SEB活化的耐受性CD8+NKT细胞在体外增殖的情况.方法:利用CFSE标记新鲜分离的C57BL/J鼠脾细胞,分别与ConA和LPS共同培养3 d,收集细胞进行荧光染色并用FCM解析细胞表面CD69分子的表达率和增殖能力.CFSE标记的鼠脾细胞与SEB共培养5 d和10 d后,荧光染色并用FCM解析细胞表面CD69的百分数和增殖能力.SEB活化的第10天细胞经CFSE标记后在IL-2的协同作用下继续培养10 d,荧光染色,FCM解析这群细胞的增殖能力、活性分子CD69的表达率和NKT细胞亚群的变化情况.结果:ConA、LPS和SEB三者均可以刺激小鼠脾细胞增殖.ConA和LPS在3 d内可以使细胞增殖3代,且CD69的表达率为74.19%和41.56%;SEB在5 d和10 d内分别可以使细胞增殖5代和7代,细胞表面CD69的表达率为32.09%和48.66%.SEB活化的10 d细胞可以在IL-2的协同下继续传代培养10 d,可以增殖7代;这群细胞中CD8+NKT细胞亚群,由原始的0.36%增加到38.58%;细胞表面CD69分子由正常值的0.11%提高到83.74%.结论:超抗原SEB活化的CD8+NKT细胞可以在体外进行增殖培养,且这些细胞是活性化的细胞.利用CFSE标记细胞,FCM可以检测耐受性CD8+NKT细胞在体外的增殖水平.
CD8+NKT细胞、超抗原、SEB、流式细胞术、CFSE
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R392.11
国家自然科学基金资助项目30671981,30571650;国家高技术研究发展计划863资助项目2006AA02Z462
2011-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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