携带eGFP及人endostatin-K5的嵌合腺病毒载体Ad5/11的构建及其体外实验研究

摘要：

目的:构建携带报告基因eGFP及人内皮他丁en-dostatin-K5的嵌合型腺病毒载体ADS/11.方法:采用重叠PCR及在细菌E coil.BJ5183中同源重组的方法,获得表达eGFP报告基因的嵌合腺病毒骨架载体,然后以经Pac Ⅰ线性化的嵌合腺病毒载体骨架与Pac Ⅰ线性化的表达endostatin-K5的腺病毒E1穿梭载体共转染真核细胞HEK 293细胞中获得携带报告基因eGFP及人endostatin.K5的嵌合型腺病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP.以获得的嵌合型腺病毒载体感染U87MG细胞,在荧光显微镜观察eGFP的表达,采用RT-PCR检测endostatin-K5的表达;将所构建的嵌合病毒载体ADS/11-E1-CMV-endo-KS/E3-CMV-eGFP与未经修饰的腺病毒载体Ad5-E1-CMV-eGFP在体外感染人胶质瘤细胞系A172及乳腺癌细胞系MDA-MB-231;通过荧光蛋白eG-FP的表达,比较它们对以上肿瘤细胞的感染效率.结果:嵌合病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP可成功地表达eGFP及endostafin-K5.以经过修饰的嵌合型腺病毒载体AdS/11-E1-CMV-endo-KS/E3-CMV-eGFP感染人脑胶质瘤细胞系A172及人乳腺癌细胞MDA-MB-231的感染效率,明显高于对照未经修饰的腺病毒载体Ad5-E1-CMV-eGFP.结论:携带eGFP及人endostatin-K5的嵌合型腺病毒载体ADS/11,可明显提高对人脑胶质瘤细胞系A172及人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的感染效率.

关键词：endostatin-K5、腺病毒载体、肿瘤、基因治疗

所属期刊栏目：27

分类号：Q291

资助基金：国家自然科学基金资助项目30872993;陕西省自然科学基金资助项目2007C201

在线出版日期：2011-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：143-145,149