细胞角蛋白8真核表达载体的构建、表达及生物信息学分析

摘要：

目的:构建人细胞角蛋白8(CK8)全长CDS序列真核表达载体,并转染人肝癌细胞SMMC7721,为研究CK8的生物学功能提供细胞模型.方法:RT-PCR扩增CK8全长CDS,克隆入pMD18-T simple vector质粒,鉴定正确后,亚克隆入质粒pEGFP-C1,构建真核表达载体pEGFP-CK8.脂质体介导转染SMMC7721细胞,荧光显微镜、real time PCR和Western blot检测CK8的表达.生物信息学软件分析CK8理化特性、信号肽及功能位点等.结果:PCR、酶切和测序结果均证实重组质粒含有人CK8全长CDS序列,转染实验表明CK8在SMMC7721细胞中发生了高表达.结论:成功地构建了人CK8全长CDS真核表达载体,并使其在SMMC7721细胞中获得高表达,为研究CK8的生物学功能奠定了实验基础.

关键词：细胞角蛋白8、全长编码序列、真核表达、生物信息学分析

所属期刊栏目：27

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30470089;国家高技术研究发展计划863资助项目2005AA214160

在线出版日期：2011-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：123-127