人工microRNA抑制PAR4表达载体的构建和应用

摘要：

目的:构建靶向PAR4的人工microRNA表达载体并用于抑制人肠癌细胞SW620中PAR4表达.方法:设计针对人PAR4的人工microRNA序列,利用2次PCR扩增获得目的片段,克隆于pMD-19T载体.经DNA测序证实后,将8个串联连接的PAR4人工microRNA序列亚克隆于真核表达载体pcDNA3.1(+),构建成pcDNA3.1(+)-8xPAR4-microRNA真核表达载体.用脂质体将表达载体转染SW620细胞,经G418筛选出稳定转染细胞系,Western blot检测PAR4的表达水平.结果:DNA测序结果表明,克隆的针对人PAR4的人工microRNA序列正确.Western blot检测结果显示,稳定转染peDNA3.1(+)-8xPAR4-microRNA载体的SW620中PAR4的表达较对照组明显受到抑制.结论:成功地构建了靶向PAR4的人工microRNA的表达载体,并能明显抑制靶基因的表达,为进一步研究PAR4的功能及探讨以PAR4为靶点的基因治疗打下了基础.

关键词：microRNA、PAR4、肠癌

所属期刊栏目：26

分类号：R735.3(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30271450,30672365

在线出版日期：2010-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1105-1107