小鼠GITRL基因腺病毒载体的构建与鉴定

摘要：

目的:构建重组腺病毒pAdEasy-GFP-GITRL,并测定病毒滴度.方法:从PIRES-GITRL载体上用Bgl Ⅱ和Sal Ⅰ双酶切,回收目的基因GITRL,插入同样用Bgl Ⅱ和Sa/Ⅰ双酶切的穿梭质粒pAdtrack-CMV中,将线性化穿梭质粒骨架质粒pAdEasy-1共转染BJ5183菌,鉴定正确后,将重组腺病毒载体pAdEasy-GFP-GITRL转染HEK293细胞,以包装出完整腺病毒.TCID50法测定重组腺病毒滴度,Western blot法检测GITRL蛋白表达.结果:成功构建小鼠GITRL基因的重组腺病毒载体(pAdEasy-GFP-GITRL),经包装后获得高滴度表达GITRL基因的重组腺病毒,病毒滴度为2.0×109pfu/mL.Western blot结果显示重组病毒载体能表达GITRL蛋白.结论:重组腺病毒表达载体(pAdEasy-GFP-GITRL)的成功构建及重组腺病毒的获得为GITRL基因干预治疗奠定了基础.

关键词：GITRL、重组腺病毒、病毒滴度

所属期刊栏目：26

分类号：R392.12

资助基金：国家自然科学基金资助项目30871193,30972748,30910103087,81072453;江苏省卫生厅科研基金资助项目H2009052;江苏省教育厅自然科学基金资助项目08KJB320002;江苏大学"拔尖人才"工程项目2008年

在线出版日期：2010-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1075-1077