成人睾丸支持细胞分离方法的建立及在胰岛移植中的应用

摘要：

目的:建立成人睾丸支持细胞简便高效分离方法,并应用于胰岛移植.方法:A组采用胰蛋白酶、DNA酶、胶原酶、透明质酸酶一步消化法;B组采用胰蛋白酶和DNA酶第一步消化,胶原酶和透明质酸酶第二步消化;C组采用胰蛋白酶和DNA酶第一步消化,透明质酸酶第二步消化,胶原酶第三步消化.采用形态学观察和免疫组化鉴定支持细胞;MTT法和流式细胞术(FCM)测定3组支持细胞的活性和纯度;Western blot检测3组支持细胞Fas-L的表达;比较3组支持细胞与胰岛共移植至糖尿病鼠的效果.结果:经鉴定,分离的细胞具有支持细胞的特征;方法A和B分离的支持细胞数鼍较多,方法B和C分离的支持细胞杂质较少;MTT法检测结果显示,B组支持细胞活性显著高于A组和C组(P<0.05);Western blot结果显示,B组支持细胞Fas-L的表达水平显著高于A组和C组(P<0.05);FCM检测3种方法分离的s支持细胞纯度分别为(85.2±1.8)%、(92.3±2.5)%、(93.1±2.6)%,B组和C组的支持细胞纯度显著高于A组(P<0.05);将3组支持细胞与胰岛共移植至糖尿病鼠模型肾包膜下,B组胰岛移植物存活时间显著高于单独胰岛移植组和A、C两组(P<0.05).结论:采用两步消化法能够获得纯度和活性较高的支持细胞,其与胰岛共移植能够显著延长移植物存活.

关键词：支持细胞、分离、胰岛、移植

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分类号：R392.11

资助基金：陕西省"13115"科技创新工程重大科技专项计划资助项目2007ZDKG-67;国家自然科学基金项目资助30772096;卫生部临床重点学科资助项目;陕西省自然科学基金资助项目30571799

在线出版日期：2011-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：552-555,559