酵母展示筛选scFv方法的建立

摘要：

目的:利用酵母展示技术建立筛选scFvs的技术平台,为今后从抗体库中筛选高亲和力抗体奠定基础.方法:改造pYD1载体,将其自身所带的GS Linker 上下游两端突变出酶切位点,构建成pYD-x;分别将IL-1β抗体的重链与轻链可变区片段插入pYD-x中GS Linker的上下游,构建出重组质粒pYSD1.从pYSD1上PCR扩增出scFv片段,并将其插入pYD1的MCS区,构建出重组质粒pYSD2.将pYSD1与pYSD2分别转入酿酒酵母EBY100中诱导表达scFv,并用流式细胞术(FCM)检测抗体展示情况.结果:经诱导后,从流式细胞仪检测结果中可以看出EBY100-pYSD1所展示的scFv与抗原结合力很弱,而EBY100-pYSD2则表现出一定强度的结合.结论:本实验证明了pYD-x载体上存在的额外的GS Linker对于抗体展示的必要性,并且成功建立了利用酵母展示载体pYD1进行scFvs筛选的技术平台.

关键词：酵母展示、pYD1、scFv、GS linker

所属期刊栏目：25

分类号：R392.11

资助基金：哈尔滨市科技创新人才发展计划资助2006RFXXS002;东北农业大学创新团队发展计划资助;黑龙江省教育厅项目11521022;哈尔滨市科技创新人才研究专项资金2008RFQXS017

在线出版日期：2010-01-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1204-1206