PON2单克隆抗体的制备与初步鉴定

摘要：

目的:制备PON2(paraxonase2)单克隆抗体(mAb),并进行初步鉴定.方法:利用生物信息学方法分析人类PON2蛋白序列,选取与小鼠同源性低,而免疫原性与亲水性均较强的片段,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-PON2和PET-32a-PON2,GST-PON2和HIS-PON2融合蛋白在大肠杆菌中进行表达, 以HIS-PON2作为免疫原制备鼠mAb,以GST-PON2作为筛选抗原.采用Western blot、间接免疫荧光鉴定mAb的特异性.结果:GST-PON2和HIS-PON2融合蛋白均在大肠杆菌中获得高效表达,经常规的细胞融合和筛选获得2株可稳定分泌抗PON2的杂交瘤细胞株,这2株抗体可以识别HepG2细胞中的靶蛋白.结论:成功制备出2株抗PON2的mAb,并通过免疫荧光技术检测了该蛋白在HepG2细胞中的分布,为进一步进行PON2蛋白的的研究提供了有效的工具.

关键词：paraxonase2(PON2)、原核表达、单克隆抗体

所属期刊栏目：25

分类号：Q813.2(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家高技术研究发展计划863资助项目2006AA02A311;国家重点基础研究发展计划973资助项目2006CB910803;国家自然科学基金资助项目30600738

在线出版日期：2010-01-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1130-1132