小鼠SKA1蛋白的多克隆抗体制备、鉴定与初步应用

摘要：

目的:制备兔抗鼠SKA1(Spindle and Kinetochore Associated 1)多克隆抗体.方法:利用PCR的方法得到小鼠SKA1基因并克隆至pGEX-2T 原核表达载体中,转化入大肠杆菌BL21表达,经IPTG 诱导表达GST-SKA1融合蛋白,经亲和层析纯化浓缩后免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,通过ELISA测定抗鼠SKA1多克隆抗体效价,用Western blot测定其特异性.结果:构建了pGEX-2T-SKA1原核表达重组质粒,并诱导表达出GST-SKA1融合蛋白,免疫新西兰大耳白兔5周后获得多克隆抗体.ELISA测定表明SKA1多克隆抗体效价为1:25 600,Western blot分析表明SKA1多克隆抗体具有良好的特异性.通过免疫组织化学方法发现,SKA1表达于高分化前列腺癌细胞中.结论:成功地制备了效价及特异性良好的兔抗鼠SKA1多克隆抗体,为SKA1基因功能的研究奠定基础.

关键词：SKA1基因、纺锤体检测点、多克隆抗体、肿瘤、小鼠

所属期刊栏目：25

分类号：R392.11

资助基金：国家高技术研究发展计划 863资助项目2008AA10Z144;加拿大卫生研究院基金项目CIHR MOP77684

在线出版日期：2009-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：239-241