pPICZα-LL37-Fcγ1重组质粒的构建及其在毕赤酵母GS115中的表达

摘要：

目的:构建pPICZα-LL37-Fcγ1重组表达载体,实现LL37-Fcγ1重组融合蛋白在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达,获得功能性抗菌蛋白.方法:通过合成LL37全基因,将其与人IgG1 Fc(Fcγ1)基因相连后,插入到毕赤酵母菌表达载体pPICZα中.电转化毕赤酵母菌GS115后,经Zeocin抗性筛选阳性菌株.用RT-PCR和斑点杂交鉴定目的基因的表达.通过亲和层析法纯化目的蛋白,并以SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.用BCA法测定目的蛋白的浓度,鲎试剂鉴定其中和内毒素的能力.结果:成功地构建了pPICZα-LL37-Fcγ1重组质粒,并证明目的基因已整合于毕赤酵母菌的基因组中.通过亲和层析获得具有结合蛋白A及中和内毒素能力的重组融合蛋白LL37-Fcγ1.结论:在毕赤酵母菌GS115中高效表达功能性的LL37-Fcγ1融合蛋白,为进一步研究奠定了基础.

关键词：巴斯德毕赤酵母、LL37、分泌表达

所属期刊栏目：23

分类号：Q78;R392(基因工程（遗传工程）)

资助基金：北京市自然科学基金;北京市教委科技发展计划KZ200410025

在线出版日期：2007-12-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：969-972