人FOXP3 cDNA的克隆及在原核细胞中的表达

摘要：

目的:克隆人FOXP3 cDNA, 构建其原核表达载体, 在大肠杆菌中表达.方法:从新生儿脐带血获得FOXP3 mRNA, 用巢式RT-PCR技术扩增FOXP3 cDNA, 产物纯化后T-A克隆连接至pMD18-T载体, 构建其原核表达载体pRSET-A-FOXP3, 转化大肠杆菌BL-21(DE3)pLysS, IPTG诱导, 表达产物经SDS-PAGE及Western blot检测和鉴定.结果:获得FOXP3 mRNA, 并对其编码区cDNA序列进行扩增.PCR产物连接至原核表达载体pRSET, 经DNA测序, 证实与GenBank中的人FOXP3编码序列一致.经SDS-PAGE及Western blot显示在相对分子质量(Mr)约为52 000处出现融合表达条带, 表达量约占菌体蛋白总量的20%.结论:成功地克隆人FOXP3 cDNA, 构建了其原核表达载体, 并在大肠杆菌中得到有效表达.

关键词：FOXP3、cDNA、克隆、原核表达

所属期刊栏目：23

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：教育部留学回国人员科研启动基金2002-HG003;第四军医大学校科研和校改项目2006

在线出版日期：2007-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：678-680