小鼠B7-H4基因克隆及真核表达载体的构建

摘要：

目的:克隆小鼠B7-H4(mB7-H4)基因cDNA全长, 构建表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-GFP和表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-Fc.方法:采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mB7-H4 cDNA, 将其全长cDNA去掉中止密码克隆入真核表达载体pEGFP-N1中, 并转染293T细胞使其表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白;将其胞外功能区cDNA克隆入pcDNA3.1-hFc真核表达载体中, 并转染COS-7细胞使其表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白.结果:序列测定证实克隆的mB7-H4全长cDNA 阅读框正确完整,酶切和序列测定证实mB7-H4分别正确插入pEGFP-N1和pcDNA3.1-hFc载体中, 两种表达载体分别转染293T细胞和COS-7细胞后可分别表达跨膜型mB7-H4-GFP和可溶性mB7-H4-Fc.结论:成功地克隆mB7-H4基因并构建了两个真核表达载体, 它们可分别表达跨膜型和可溶性融合蛋白.

关键词：B7-H4、真核表达、基因克隆、载体构建

所属期刊栏目：23

分类号：R392.11

资助基金：广东省科学事业费计划2006B36002021;高等学校博士学科点专项科研项目20040487056;广东医学院博士基金B2006091

在线出版日期：2007-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：665-667