人杀菌/通透性增强蛋白活性片段基因在CHO细胞中的表达

摘要：

目的:获得人杀菌/通透性增强蛋白(bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)N端活性片段蛋白,为BPI 结构和功能的研究提供有力的工具.方法:提取人外周血多形核白细胞(PMN)总RNA进行逆转录反应,经套式PCR扩增出BPI N端基因片段,将其克隆入pUC19载体中并进行酶切鉴定和序列测定,然后亚克隆入质粒pcDNA3构建真核表达载体pcDNA-BPI;重组载体通过脂质体转染CHO细胞并筛选阳性克隆,免疫荧光法鉴定重组BPI的表达和免疫学活性.结果:酶切鉴定和序列分析证实重组质粒含有包括信号肽在内的BPI活性片段编码序列,与文献报道的序列相比,有6个核苷酸差异.转染筛选的阳性CHO细胞克隆表达产物能够被抗BPI的单克隆抗体所识别.结论:BPI活性片段表达载体的构建及真核表达成功,为BPI功能的研究奠定了基础.

关键词：杀菌/通透性增强蛋白、逆转录PCR、真核表达

所属期刊栏目：23

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金39800154

在线出版日期：2007-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：416-419