核因子-κB p50亚基同源结构域的克隆鉴定及自主报告基因活性的检测

摘要：

目的:获得NF-κBp50亚基同源结构域(RHD)cDNA及构建酵母双杂交系统的"饵"载体,并检测靶基因的酵母细胞毒性及自主报告基因的活性.方法:提取人外周血单个核细胞(PBMC)的总RNA,以RT-PCR扩增NF-κBp50亚基RHD基因片段,重组入酵母双杂交载体pGBKT7中.应用乙酸锂法,将重组质粒转化酵母细胞AH109,在SD/-Trp选择培养基上培养,观察转化株的生长情况;用滤膜影印法验证靶基因有无自主报告基因的活性.结果:经酶切及PCR鉴定,重组质粒中插入片段的大小与预期的结果相符.测序结果表明,其基因序列正确,无读码框移位,命名为pGBKT7-p50.转化酵母细胞后,对酵母细胞无毒性也无自主报告基因的活性.结论:pGBKT7-p50可作为酵母双杂交系统中的"饵"载体,用于后续的肽库筛选,捕捉与靶基因相互作用的多肽.

关键词：核因子-κB、p50、酵母双杂交系统、自主报告基因活性

所属期刊栏目：20

分类号：Q781(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划G1999054203;国家自然科学基金30080009;重庆市科委科研项目2000-6319

在线出版日期：2004-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：419-421