抗艰难梭菌A毒素单克隆抗体的制备及特性分析

摘要：

目的: 制备抗艰难梭菌A毒素的单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性.方法: 用纯化的艰难梭菌A毒素免疫BALB/c小鼠, 将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合, 采用间接ELISA筛选杂交瘤细胞.用ELISA检测mAb腹水的效价、相对亲和力和进行表位分析; 用Western blot检测mAb的特异性.结果: 得到6株杂交瘤细胞株, 5C10株细胞分泌的mAb为IgG2a, 4B5和8A1株细胞分泌的mAb为IgG1, 其他3株细胞mAb (2H7、3E9和6G8)均分泌IgM.中和试验表明, 所有的mAb均无中和活性.腹水mAb的效价均在10-4以上, 其中mAb 2H7、6G8、5C10、4B5和8A1具有共同的表位, 而mAb 3E9识别的位点与其他5株不同. mAb 8A1和4B5 的相对亲和力>105, 其他4株mAb的相对亲和力>104.在非变性条件下, PAGE后Western blot的结果显示, 6株mAb均可与相对分子质量(Mr)为55×104的A毒素产生反应; 而在变性条件下, 还原与非还原SDS-PAGE后Western blot均显示, 6株mAb均可与Mr为5×104～24×104的A毒素产生反应.结论: 6株杂交瘤细胞株均能分泌抗艰难梭菌A毒素的特异性mAb, 为艰难梭菌A毒素的研究提供了有利的工具.

关键词：艰难梭菌、A毒素、单克隆抗体

所属期刊栏目：20

分类号：R392.11

在线出版日期：2004-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：376-378